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植物茎尖培养

外植体的选取及预处理

⑴、外植体选取

选择生长健壮、已发芽、长势较好、无病害的生姜根状茎作为外植体。

⑵、材料预处理

取带芽的枝条或鳞茎球茎,洗衣粉适量冲洗,然后扳取或用清洁剪刀剪取带芽部位(约1cm×1cm大小),顶芽和腋芽、大芽和小芽分开。继续用洗衣粉清洗10分钟,清洗时需不停晃动。再用自来水冲洗干净,置空培养瓶备用。

2、超净工作台无菌操作准备

检查超净工作台,是否已开机灭菌,酒精灯、酒精瓶、升汞是否齐备、无菌水、培养瓶放置与位置、接种器械是否齐备与放置。

3、外植体消毒

⑴、蒸馏水冲洗

外植体置于已杀菌开机的超净工作台上,新洁尔灭洗液消毒双手,无菌蒸馏水清洗外植体2-3次,需随时晃动。

⑵、酒精消毒

75%酒精倒入装外植体的容器内,消毒外植体5-60s,时间长短视植物材料情况而定,一般幼嫩材料和室内带菌培养材料消毒时间短,老材料或室外材料消毒时间长。动作一定迅速,需晃动,然后将酒精倒去。整个时间计算以酒精倾倒开始至酒精倒出瓶外为止。

⑶、升汞消毒

1%生汞倒入装外植体的容器内,消毒外植体5-10min,时间长短视情况而定。需晃动,在最后3min静置,升汞注满容器,将已灼烧的镊子放入容器升汞内浸泡。

10%次氯酸钠溶液倒入装外植体的容器内,消毒外植体10-12min,时间长短视情况而定。

⑷、蒸馏水清洗

用镊子将外植体取出,放入另一无菌蒸馏水瓶中清洗,反复清洗4次。

4、材料的整理

用灼烧冷却的镊子和剪刀对外植体进行处理,剥离外植体材料芽外部小叶片,露出尖端生长点和2-3片叶原基部分,将此部分剪下做培养材料。再用无菌蒸馏水清洗3-4次。

5、接入培养基

培养基瓶放入工作台内,将剥离的材料分别用消毒过的镊子放入培养瓶内,盖上瓶盖,置培养篮内,写上培养时间、操作人及培养品名,入培养室培养。

实践指导

1、操作中严格有菌观念、无菌操作。

2、操作前一定先换上工作服、专用鞋、清洁双手。

3、超净工作台工作前,检查工作台是否开启紫外灯和风机,酒精灯、消毒器械的酒精、消毒液是否准备齐备。蒸馏水、培养基是否齐备。

4、工作时培养基、蒸馏水、消毒液等放置齐整,器械取出后放入消毒液里,用过的溶液、线和报纸放在工作台外。

5、接种工具不能碰触瓶口和工作台其它部位,手不能碰触瓶口,更不能伸入瓶内,不能碰触材料。

6、无菌水和酒精、升汞处理材料时需不断晃动,便于材料与液体充分接触。

7、酒精、升汞处理材料时间必须适宜,时间短消毒效果不理想,时间长会将材料杀死。

8、操作细致,水不要洒在工作台上,掉落在台面的材料不能再用。

9、操作完毕,须在瓶上注明日期、操作人,便于观察。

10、有些同学器械放置很乱,整个超净工作台面乱七八糟,影响效果。

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作者: 根盆网

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